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凱氏定氮法是由丹麥化學(xué)家凱道爾于1883年建立的。凱氏定氮法是測(cè)定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下,用濃硫酸消化樣品將有機(jī)氮都轉(zhuǎn)變成無(wú)機(jī)銨鹽,然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨,隨水蒸氣蒸餾出來(lái)并為過(guò)量的硼酸液吸收,再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定,就可計(jì)算出樣品中的氮量。由于蛋白質(zhì)含氮量比較恒定,可由其氮量計(jì)算蛋白質(zhì)含量,故此法是經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法。
根據(jù)凱氏定氮原理測(cè)定需要三個(gè)步驟,即消化、蒸餾、滴定。
消化:將含氮的有機(jī)化合物(蛋白質(zhì))與濃硫酸和催化劑(硫酸銅或凱氏消化片)一同加熱,使蛋白質(zhì)分解,其中碳和氫被氧化成二氧化碳和水逸出,而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨(NH3)并與硫酸結(jié)合形成硫酸銨。(銨 NH4+)
消化過(guò)程:微火加熱煮沸,燒瓶?jī)?nèi)物質(zhì)炭化變黑,產(chǎn)生大量泡沫,泡沫消失后加大火力保持微沸狀態(tài),至液體成藍(lán)綠色澄清狀態(tài)后繼續(xù)加熱 05-1h,結(jié)束后冷卻。
蒸餾:得到的溶液經(jīng)稀釋定容后加入NaOH,蒸餾釋放出NH3,冷凝之后收集于硼酸溶液中。
蒸餾過(guò)程:先將消化好的樣品進(jìn)行稀釋,加入NaOH,經(jīng)過(guò)加熱后產(chǎn)生的氨氣進(jìn)入冷凝管,經(jīng)過(guò)冷凝之后流入裝有硼酸溶液的接收瓶中。形成硼酸銨。(硼酸溶液中加有混合指示劑,形成硼酸銨之后吸收液由酸性變?yōu)閴A性,顏色由紫紅轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)綠色。)
滴定:用已知濃度的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定,根據(jù)鹽酸消耗的量來(lái)計(jì)算出氮的含量,然后乘以相應(yīng)的換算因子,即得到蛋白質(zhì)的含量。(滴定是指一種定量分析的手段,也是一種化學(xué)實(shí)驗(yàn)操作。它通過(guò)兩種溶液的定量反應(yīng)來(lái)確定某種溶質(zhì)的含量,是根據(jù)指示劑的顏色變化指示滴定終點(diǎn),然后目測(cè)標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗體積,計(jì)算分析結(jié)果)
滴定過(guò)程:用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴入硼酸銨溶液中,使溶液的顏色由藍(lán)綠色變?yōu)闇\紅色。
德瑞克儀器股份根據(jù)原理研發(fā)了德瑞克凱氏定氮儀,產(chǎn)品一經(jīng)推出便引起了市場(chǎng)關(guān)注。
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